【摘 要】
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目的:海洋星虫多糖是从海洋生物中提取分离得到的一种动物多糖,如何快速、简单、准确地对其多糖含量进行测定,这对于海洋星虫多糖的纯化效率、质量控制和开发应用具有极其
【出 处】
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全国第二届海洋与陆地多糖多肽及天然创新药物研发学术会议
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目的:海洋星虫多糖是从海洋生物中提取分离得到的一种动物多糖,如何快速、简单、准确地对其多糖含量进行测定,这对于海洋星虫多糖的纯化效率、质量控制和开发应用具有极其重要的意义.目前对于多糖的含量测定方法有蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、滴定法、高效液相色谱法、气相色谱法、薄层扫描法等,本研究对中国药典最常采用的两种方法苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法进行对比研究,旨在筛选一种适合于星虫多糖的含量测定方法,从而为该药的质量控制奠定基础,也为其新药申报项目资料,提供必要的实验方法和数据.方法:硫酸-蒽酮测定法:分别精密吸取对照品溶液0.2 ml、0.4 ml、0.6ml、0.8 ml、1.0 ml,置10ml具塞试管中,加水至2.0ml,精密加入硫酸-蒽酮溶液6 ml,摇匀,置水浴中加热15分钟,取出,放入冰浴中冷却15分钟,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法,在625 nm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,样品溶液采用同样方法操作,并进行多糖含量计算.硫酸-苯酚测定法:分别精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4 ml、0.6ml、0.8 ml、1.0 ml,置10 ml具塞试管中,加水至1.0 ml,向溶液中加入苯酚溶液1ml,然后快速加入5.0ml硫酸,摇匀,置30℃水浴中加热20分钟,取出,在490nm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,同法进行供试品溶液中总糖的含量测定.结果:硫酸-蒽酮法与硫酸-苯酚法测定的含量分别为86.51%和83.28%,其回收率分别为99.8%和96.3%,其稳定性测定中RSD分别为1.2%和5.3%,两种方法测得多糖含量基本相同,无显著性差异(P>0.05).结论:两种测定法测定结果相近(p>0.05),但硫酸-苯酚测定法显色稳定性较差,要严格控制加热时间和冰浴时间,并且在测定中要快速进行,否则不同操作者之间会带来较大误差.因此,综合考虑,硫酸-蒽酮测定法简便、快速、准确,可用于海洋星虫多糖中多糖的质量控制.
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