【摘 要】
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目的：新生儿在围产期发生缺血缺氧性脑损害是造成儿童神经系统发育障碍的主要原因,本研究主要观察这个病理过程中自噬发生的情况.方法：选取3日龄的(P3)Sprague-Dawley(SD)鼠共100只,体重(8.05±0.244)g,雌雄不拘,同窝随机配对到假手术组(Sham,n=50)和缺血缺氧组(HI,n=50)2组,共50对.Sham组仅分离左侧颈总动脉不结扎；HI组行左侧颈总动脉结扎术.两组大
【出 处】
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中国中西医结合麻醉学会年会暨第二届全国中西医结合麻醉学术研讨会
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目的：新生儿在围产期发生缺血缺氧性脑损害是造成儿童神经系统发育障碍的主要原因,本研究主要观察这个病理过程中自噬发生的情况.方法：选取3日龄的(P3)Sprague-Dawley(SD)鼠共100只,体重(8.05±0.244)g,雌雄不拘,同窝随机配对到假手术组(Sham,n=50)和缺血缺氧组(HI,n=50)2组,共50对.Sham组仅分离左侧颈总动脉不结扎；HI组行左侧颈总动脉结扎术.两组大鼠术毕恢复(1.5-2.5)h后再分别放置于含(6％_O2 +94％N2)的混合气体和空气的两个完全对称密闭培养箱中40min.其中10对大鼠用于观察各组大鼠生长发育,包括体重变化,睁眼时间.剩余40对大鼠随机分为4组,分别于造模后12h、24h、48h、72h四个时间点处死,每只大鼠麻醉处死后冰上取材,沿耳缘线钱7mm做冠状切面,前半部分用于10％福尔马林固定,石蜡切片,留作光镜观察.后半部分取左半脑脑室周围脑白质,分为2部分,一部分用3％戊二醛-1.5％多聚甲醛固定,4℃保存,留作电镜观察：另一部分脑白质组织低温冻存,留做westem blot检测,比较各组大鼠脑室周围脑白自噬相关蛋白(LC3)的表达情况.统计学方法应用SPSS13.0软件进行统计学分析,计量资料用均数±标准差(灶s)表示,两组间比较采用独立样本t检验；组间比较采用ONE-WAY方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果：(a)观察发现：与Sham组相比,HI组大鼠左眼睁眼时间延迟而右眼睁眼时间提前(p＜0.01).(b)通过HE染色观察Sham组与HI组脑白质组织病理改变,Sham组左脑室周围组织脑白质厚而饱满,神经元排列整齐、有序,结构未见明显异常；HI组左侧脑室周围脑白质组织神经细胞排列紊乱,细胞周隙增宽,失去正常结构层次.(c)通过电镜观察发现HI组大鼠脑白质可见大量肿胀的内质网和线粒体、双层膜结构自噬体、溶酶体和自噬溶酶体,随着缺血缺氧时间的延长,自噬水平随之升高；Sham组大鼠脑白质中细胞超微结构基本正常,可见少量自噬体,但随着修复时间的延长而减少,72h后自噬体消失(d)通过Western blot检测发现HI组大鼠脑白质LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平随缺血缺氧时间的延长而上升；Sham组大鼠脑白质LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平随时间的延长而下降；与Sham组比较,HI组大鼠脑白质自噬水平在HI后12h、24h时呈抑制状态(p＜0.01),48h、72h呈促进状态(p＜0.01).结论：新生大鼠HI模型能激活自噬发生,自噬和大鼠损伤程度之间的关系如何有待于进一步探讨.
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