【摘 要】
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本实验通过控制内源性保护剂合成途径以及转运途径,探索内源保护剂对菌株冷冻干燥存活率的影响,通过在缺乏L-和D-乳酸脱氢酶的突变菌株过表达两个山梨醇-6-磷酸脱氢酶（Stl6PDH）基因（srlD1和srlD2）,获得Δldh-srld菌株;敲除植物乳杆菌山梨醇磷酸转移酶系统基因簇（Sorbitol phosphotransferase transport system,pts srld）,获得Δp
【机 构】
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上海理工大学健康科学与工程学院上海食品微生物工程技术研究中心
【出 处】
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第十七届益生菌与健康国际研讨会摘要集
论文部分内容阅读
本实验通过控制内源性保护剂合成途径以及转运途径,探索内源保护剂对菌株冷冻干燥存活率的影响,通过在缺乏L-和D-乳酸脱氢酶的突变菌株过表达两个山梨醇-6-磷酸脱氢酶（Stl6PDH）基因（srlD1和srlD2）,获得Δldh-srld菌株;敲除植物乳杆菌山梨醇磷酸转移酶系统基因簇（Sorbitol phosphotransferase transport system,pts srld）,获得Δpts srld菌株。与野生型菌株相比,AR113Δldh-srld2菌株在不添加山梨醇的冷冻干燥存活率提升到40%;在添加山梨醇的情况下,敲除pts srld菌株（Δpts srld）存活率与野生型相比显著下降,说明胞内山梨醇起着重要作用。进一步研究了胞内海藻糖对植物乳杆菌AR113冷冻干燥存活率的影响,一方面通过表达来源于大肠杆菌DH5 α的海藻糖合成基因otsA和otsB（简称otsBA）,得到AR113-otsBA菌株,构建出海藻糖的异源合成途径;另一方面对植物乳杆菌完善的海藻糖磷酸转移酶转运系统（Trehalose phosphotransferase transport system,pts tre）进行敲除获得Δpts tre菌株。结果 AR113-otsBA胞内海藻糖浓度为32.72 mg/L,且在PBS条件下的冷冻干燥存活率能达到48.75%。添加海藻糖对Δpts tre菌株的保护效果比在野生型中减弱15%。以上证明胞内海藻糖和山梨醇在植物乳杆菌AR113冷冻干燥过程中的保护效果。利用PEF处理将保护剂加载进入胞内,发现不同菌株的存活率显著升高,并降低了菌株差异性。
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