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目的：苯并[a]芘经机体肝微粒体酶活化,形成终致癌产物BPDE,能与DNA结合形成加合物.修复BPDE-DNA加合物的个体差异,与DNA修复基因多态性密切相关.ERCC2/XPD是一种进化保守的ATP依赖性DNA解旋酶.ERCC2/XPD Lys751Gln(rs13181)多态与肿瘤发生的遗传易感性相关.然而人群流行病学研究结果的不一致性提示人们需要标化环境因素暴露,以探讨基因多态与环境致癌因子的交互影响.
方法：通过Gateway定向克隆法构建ERCC2/XPD Lys751Gln(rs13181)位点不同基因型的质粒,转染中国仓鼠卵巢细胞突变型UV5(ERCC2/XPD表达缺失),获得稳定表达该位点不同基因型的转染细胞系.应用MTT法测定B[a]P处理后ERCC2/XPD Lys751Gln不同基因型转染细胞的抑制率;彗星实验测定B[a]P所致DNA的损伤情况.
结果：1.ERCC2/XPD rs13181AA(Lys751)、rs13181CC(Gln751)和GFP质粒分别同时转染UV5细胞,转染效率均达到90％以上.2.两种转染细胞UV5ERCC2(AA)和UV5ERCC2(CC)可表达分子量为87kD的ERCC2/XPD蛋白,证实细胞转染成功,并验证转染细胞不同基因型.3.ERCC2/XPD缺失型细胞(UV5和UV5GFP)与野生型AA8相比,对B[a]P表现出较强的敏感性.而ERCC2/XPD过表达转染细胞则表现出与AA8相似的细胞抑制率.在B[a]P处理24h时,两转染细胞存活率并无明显的差异,但经过24h恢复,UV5ERCC2(CC)的细胞存活率明显低于UV5ERCC2(AA)(P＜0.05).5.彗星实验显示ERCC2/XPD过表达可以使DNA损伤修复能力增强.B[a]P处理6h和12h后,除10μM B[a]P处理6h外,两种转染细胞间差异有统计学意义(P＜0.05).
结论：1.本研究通过获得稳定表达ERCC2/XPD Lys751Gln(rs13181)位点不同基因型的转染细胞系,提供体外研究基因多态的一种试验技术.2.ERCC2/XPD Lys751Gln(rs13181)SNP位点AA基因型转染细胞的损伤修复能力明显优于其突变型CC基因型.因此该位点可能与环境致癌因子所致DNA损伤修复能力差异相关联.