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背景:CD1d限制性T细胞根据其TCR组成可分为TCR组成相对恒定的Ⅰ型NKT细胞与TCR组成多样的Ⅱ型NKT细胞。不同于Ⅰ型NKT细胞在小鼠内富集,Ⅱ型NKT细胞在人体内比例较高,并在自身免疫性疾病,肿瘤及感染免疫中发挥重要的作用。然而现有研究对Ⅱ型NKT细胞认知极少,其在人体内明确的比例与功能尚属未知,极大地限制了Ⅱ型NKT细胞相关免疫疾病认识与干预手段建立。方法:本实验将Ⅱ型NKT细胞特异性抗原Sulfatide加载的K562-CD1d细胞(Sulfatide-K562-CD1d)作为刺激细胞,并设立Ⅰ型NKT细胞特异性抗原α-GalCer加载的K562-CD1d细胞(αGalCer-K562-CD1d)作为对照,对比分析正常人群外周血中PBMC接受刺激后细胞因子分泌情况;并制备Sulfatide/CD1d四聚体检测人外周血中Sulfatide特异性Ⅱ型NKT细胞比例。结果:我们发现:对比于αGalCer-K562-CD1d细胞,Sulfatide-K562-CD1d细胞能够刺激外周血PBMC细胞产生更多的IFN-γ/IL-2/IL-6/IL-10/IL-17/TNF-α等细胞因子,提示人体外周血中含有比Ⅰ型NKT细胞更高比例的Ⅱ型NKT细胞。通过Sulfatide加载的CD1d四聚体与空载的CD1d四聚体对外周血中PBMC染色分析发现,Sulfatide反应性Ⅱ型NKT细胞占外周血PBMC比例较低,仅为0.1%左右,然而外周血中非Sulfatide反应性Ⅱ型NKT细胞的比例有待后续试验进一步检测。讨论:本研究对健康个体外周血中Sulfatide反应性的Ⅱ型NKT细胞的比例与功能进行了初步研究。在后续实验中,需要进一步应用酶联免疫斑点(ELISPOT)法明确其它脂类抗原反应性Ⅱ型NKT细胞的比例,并对正常人群及不同疾病患者中Ⅱ型NKT细胞的数量与功能进行对比分析,以探索Ⅱ型NKT细胞在免疫相关疾病中的作用及可能干预靶点。