基于荧光光谱法的中华蜜蜂化学感受蛋白与化学配基的相互作用

来源 :第八届全国化学生态学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:die0410
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  本实验通过对中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3进行原核表达、诱导条件优化后,分离纯化得到体外重组的AcerCSP3蛋白,并利用荧光法研究了AcerCSP3与N-苯基-1-萘胺(N-Phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)以及候选化学配基的结合特征.其中AcerCSP3与其特异性配基1-NPN的相互作用关系中,研究表明1-NPN能使CSP3在328 nm(λem)处产生猝灭,且猝灭机理为静态猝灭,另外猝灭过程中ΔH0>0,ΔS0>0,表明二者间的主要作用力为疏水相互作用.依据F(o)rster非辐射能量转移机制,得到二者的结合距离为9.3 nm,能量转移效率E=0.054.根据同步荧光技术考察l-NPN对CSP3的构象的影响,表明CSP3荧光主要贡献者——色氨酸残基的最大发射波长略有红移,表明原处于疏水腔中的色氨酸残基由于所处环境的极性增加,而使CSP3构象产生变化.Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29 μmol/L,结合位点数约等于1.
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