【摘 要】
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冰冻海洋中生存的南极eelpout(Lycodichthys dearborni)体内能合成高浓度的Ⅲ型抗冻蛋白(AFP Ⅲ).为了寻找新的AFP Ⅲ基因,构建了L.dearborni肝脏cDNA文库.通过斑点杂交筛选此文库,发现一个287 kb的cDNA克隆 LD12.序列分析采用DNAssist 2.0和ClustalX 1.8软件.结果显示,LD12分子由12个串联重复的片段构成,每一个片段
【机 构】
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上海海洋大学,水产与生命技术学院,上海 201306
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冰冻海洋中生存的南极eelpout(Lycodichthys dearborni)体内能合成高浓度的Ⅲ型抗冻蛋白(AFP Ⅲ).为了寻找新的AFP Ⅲ基因,构建了L.dearborni肝脏cDNA文库.通过斑点杂交筛选此文库,发现一个287 kb的cDNA克隆 LD12.序列分析采用DNAssist 2.0和ClustalX 1.8软件.结果显示,LD12分子由12个串联重复的片段构成,每一个片段编码一个61个氨基酸(aa)的Ⅲ型抗冻蛋白分子和一个9aa的连接子.这是第一次在合成AFP Ⅲ的极地鱼类中发现这样的多聚蛋白结构基因.有趣的是,组成、结构和起源都不相同的抗冻糖蛋白AFGP,其基因也呈现类似的多聚蛋白结构的现象.因此,这种独特的多聚基因结构可能是鱼类基因组在适应极端寒.本文章从LD12 cDNA中克隆得到AFPⅢ的单体四聚体(LD4),通过转染得到斑马鱼细胞系中过表达的LD4.对LD4进行功能研究,发现LD4能够减少斑马鱼细胞在低温胁迫下的凋亡,揭示鱼类Ⅲ型抗冻蛋白的抵御低温胁迫的分子机制.
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