【摘 要】
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旨在利用昆虫细胞表达犬流感病毒(CIV)核蛋白(NP),并以此作为抗原建立检测CIV抗体的间接ELISA方法.从CIV感染的MDCK细胞中提取总RNA,用RT-PCR法扩增NP基因,连接到pFastBacHTA载体上,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒NP-DH10,穿梭质粒转染sf-9昆虫细胞,获得重组病毒P1-NP.病毒传至第3代后,用Western blot及IFA鉴
【机 构】
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江苏省农业科学院 兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏 南京 210014 南京
【出 处】
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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会
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旨在利用昆虫细胞表达犬流感病毒(CIV)核蛋白(NP),并以此作为抗原建立检测CIV抗体的间接ELISA方法.从CIV感染的MDCK细胞中提取总RNA,用RT-PCR法扩增NP基因,连接到pFastBacHTA载体上,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒NP-DH10,穿梭质粒转染sf-9昆虫细胞,获得重组病毒P1-NP.病毒传至第3代后,用Western blot及IFA鉴定昆虫细胞表达的蛋白与兔抗犬流感病毒NP蛋白多抗及鼠抗CIV血清发生特异性反应.NP蛋白纯化后作为抗原,建立检测CIV抗体的间接ELISA方法.优化后确定蛋白最佳包被浓度为2μg/ml,血清最佳稀释度为1:100.用建立的间接ELISA方法和血凝抑制(HI)同时检测136份血清样品,ELISA法检出129份阳性,检出率为94.85％;HI检出120份阳性,检出率为88.23％,二者符合率为93.38％,ELISA检测方法的阳性率高于血凝抑制.结果表明,利用昆虫细胞表达的NP蛋白做为抗原,建立的检测CIV抗体的间接ELISA方法特异性好,重复性高,可用于犬流感的诊断和流行病学调查.
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