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目的:老年性痴呆(AD)的病理特征之一是神经细胞内神经原纤维缠结(NFTs),高度磷酸化的微管相关蛋白Tau蛋白是NFTs的主要成分。Tau蛋白的磷酸化主要受蛋白激酶和磷酸酯酶的调节。本实验借鉴血清药理学的方法,用三焦针法针刺SD大鼠,探讨"益气调血,扶本培元"针法对tau蛋白磷酸化水平的影响。方法:采用蛋白磷酸酶(PP2A、PP1)选择性抑制剂冈田酸(OA)与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH共孵育,造成神经元微管相关蛋白tau异常过度磷酸化,建立拟AD病人脑中PP2A活性下降的细胞模型。实验分组:正常鼠血清10%(对照组),正常鼠血清10%+0A(模型组),针刺鼠血清10%(针刺对照组),针刺鼠血清5%+OA(小剂量组),针刺鼠血清10%+OA(中剂量组),针刺鼠血清20%+OA(大剂量组)。将SD大鼠随机分为空白对照组和针刺组各15只,对照组大鼠抓空处理,针刺组大鼠三焦针法(膻中,中脘,气海,血海(双),足三里(双),外关(双)6穴)连续针刺15天,最后一次针刺后1 h,腹主动脉取血,收集血清,同组血清混合,-20℃冻存。正常鼠血清、针刺鼠血清分别与SK-N-SH细胞预孵育24h,再用OA与细胞共孵育6h。采用Western blotting方法观察不同位点磷酸化tau蛋白的表达水平及蛋白磷酸酯酶通路上PP2A,p-PP2A、DM-PP2A(demethyled PP2A),酪氨酸激酶Src、p-Src-Y416、p-Src-S529、蛋白磷酸酯酶1B(PTP1B)及PP2A甲基转移酶(LCMT)的表达。结果与讨论:OA能够引起细胞内tau蛋白在Thr205,Ser214,PHF-1位点的升高,针刺血清中剂量和大剂量能明显降低tau蛋白在Thr205,Ser214,PHF-1位点的磷酸化水平;而不改变总tau含量。OA能增加p-PP2A、DM-PP2A的表达水平从而抑制PP2A活性致tau蛋白的过度磷酸化。针刺能够降低模型组细胞内p-PP2A、DM-PP2A表达。本实验继续研究影响p-PP2A与DM-PP2A表达的相关蛋白。有研究表明,p-Src-Y416激活Src从而增加PP2A磷酸化增加导致PP2A活性下降,而p-Src-S529对Src具有抑制作用。本实验中发现,OA模型组p-Src-Y416表达增加,大剂量针刺血清能明显降低其表达。LCMT能够降低PP2A的甲基化水平,本实验发现OA能明显抑制LCMT的表达,中、高剂量针刺血清能明显增加LCMT的表达,抑制DM-PP2A的表达水平。结论:三焦针法针刺血清可拮抗OA诱导的tau蛋白过度磷酸化,其降低tau蛋白过度磷酸化可能是通过降低p-Src-Y416和增加LCMT的表达,从而抑制PP2A的磷酸化和去甲基化修饰,提高PP2A活性进而使tau蛋白去磷酸化。说明三焦针法对抗击衰老中具有很好的应用前景。