【摘 要】
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目的 1、评价多能干细胞在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上培养的情况;2、探讨在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上培养多能干细胞能否成为一种高效的体外扩增干细胞
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目的 1、评价多能干细胞在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上培养的情况;2、探讨在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上培养多能干细胞能否成为一种高效的体外扩增干细胞技术;3、建立多能干细胞在ECM上培养的培养系统。方法对照组:在饲养层用KSR培养液培养H1及HIPSCs;实验组:将H1、HIPSCs分别接种在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上,分别KSR、MTeSR1培养液培养ECM上的H1和HIPSCs。实验组及对照组均传代培养,镜下观察H1、HIPSCs细胞形态学变化。传代培养5次后,对H1、HIPSCs进行碱性磷酸酶活性检测、干细胞表面marker的免疫染色检测、干性因子的去甲基化分析、干细胞内源基因的表达分析、端粒酶活性检测、核型检测、拟胚体形成、畸胎瘤形成实验。结果 1、在ECM上用KSR培养液培养的H1、HIPSCs,无法维持细胞干性。2、实验组中用MTeSRl培养液培养的H1及HIPSCs形态类似于对照组的H1及HIPSCs。实验组中用MTeSR1培养液培养的H1及HIPSCs,细胞AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rexl表达量增高,外源编程基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc表达沉默,细胞体内分化为畸胎瘤。结论 1、多能干细胞在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上用MTeSRl培养液培养可以维持细胞干性;2、ECM和MTeSR1培养液可作为新的多能干细胞培养系统;3、在间充质干细胞来源的细胞外基质(ECM)上培养多能干细胞,可考虑开发为一种高效的体外扩增干细胞技术。
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