【摘 要】
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目的 拟在前期工作的基础上通过组织标本、细胞学实验和动物体内实验进一步明确：TMEFF2与SHP-1结合在胃癌发生和发展不同时期的变化及其意义；TMEFF2与SHP-1结合的确切结构
【机 构】
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200000 上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 拟在前期工作的基础上通过组织标本、细胞学实验和动物体内实验进一步明确：TMEFF2与SHP-1结合在胃癌发生和发展不同时期的变化及其意义；TMEFF2与SHP-1结合的确切结构域和氨基酸位点；TMEFF2与SHP-1结合对胃癌生物学行为的影响.以揭示TMEFF2与SHP-1的蛋白质相互作用在胃癌发病中的意义,探讨新靶点,为胃癌治疗提供理论依据.方法 收集正常胃上皮、萎缩性胃炎、肠化、胃部异型增生组织和不同病理分级的胃癌组织各20例,采用免疫荧光和荧光能量共振转移试验(FRET)检测TMEFF2和SHP-1在上述组织中的表达和共定位,并分析两者的结合与不同病理阶段的相关性.培养人正常胃上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(AGS、MKN45),FRET和免疫荧光染色确定两者在细胞内的结合和共定位情况.整合分析COSMIC和CCLE等癌症组织/细胞基因组数据库,针对TMEFF2与SHP-1相互结合的结构域中发生频率高的突变位点设计突变质粒,转染胃癌细胞后检测两者的共定位及其结合情况的变化,并进一步分析两者的结合对胃癌生物学行为的影响.结果 胃正常上皮细胞(GES-1)中免疫荧光染色显示TMEFF2与SHP 1存在共定位,FRET显示两者有较强的结合；在胃癌细胞(AGS、MKN45)中两者共定位和结合减弱.在正常胃上皮、萎缩性胃炎、肠化、胃部异型增生组织和胃癌组织中,免疫荧光染色和FRET结果均显示TMEFF2与SHP-1两者的结合逐渐减弱.GES-1细胞中干扰SHP-1与TMEFF2的结合后,TMEFF2抑制细胞增殖的能力减弱.结论 TMEFF2与SHP-1的结合在胃癌的发生和发展中发挥重要作用,干扰两者结合会影响胃癌的生物学行为.
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