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目的:重组表达梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)蛋白FlaA(TP0249)、TpN17(TP0435)、TpN47(Tp0574),研究FlaA、TpN17、TpN47在梅毒临床血清学诊断中应用,与TpN17、TpN47已有研究成果相结合,为完善和补充现有研究成果,及进一步研究梅毒的致病机制和相关疫苗提供实验依据。方法:构建重组蛋白FlaA、TpN17、TpN47原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,使用重组蛋白为抗原蛋白,以待测血清标本为一抗,以辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgG(H+L)为二抗,进行Western blot试验,检测临床收集的160份TPPA阳性梅毒血清、30份TPPA阴性的易发生交叉反应(怀孕、自身免疫性疾病)的血清及30份TPPA阴性且无交叉反应因素的非梅毒血清,初步评价梅毒螺旋体重组蛋白FlaA、TpN17、TpN47在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果:含有重组质粒PET-28a-F1aA、PET-28a-TpN17、PET-28a-TpN47的表达宿主菌在IPTG诱导下分别表达了相对分子质量约为37kDa、17kDa、47kDa的重组蛋白。以重组蛋白FlaA、TpN17、TpN47为抗原,通过Westernblot检测TPPA阳性梅毒血清、TPPA阴性的易发生交叉反应的非梅毒血清及TPPA阴性且无交叉反应因素的非梅毒血清共220份,有16例假阴性结果,无假阳性结果。结论:成功构建了PET-28a-FlaA、PET-28a-TpN17、PET-28a-TpN47原核表达载体,并在表达宿主菌大肠杆菌BL-21(DE3)中成功表达。重组蛋白FlaA、TpN17、TpN47联合Western blot检测梅毒具有较好的敏感度和特异度;FlaA的存在,极大的提高了重组蛋白联合Western blot检测的敏感度,显示出重组蛋白FlaA在临床诊断方面较高的应用价值;TpN47和TpN17在梅毒检测中有互补的效果,FlaA、TpN17、TpN47联合Western blot检测中三种蛋白选用合理,发挥了各自的作用。为梅毒诊断寻找新的未知蛋白靶点提供了实验依据。