【摘 要】
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用SCAR标记技术对小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)生理小种特异性DNA片段进行转化和检测研究,为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果,采用L,.(45)正交试验设计,对影响ISSR-PCR的5个主要因素：Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板DNA和引物添加量进行5因素4水平的筛选分析,确定了小麦条锈菌ISSR-PCR反应的最适宜条件
【机 构】
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中国农业大学农学与生物技术学院,北京 100193;河南科技大学林学院,洛阳 471003 中国农
【出 处】
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中国植物保护学会2014年学术年会
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用SCAR标记技术对小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)生理小种特异性DNA片段进行转化和检测研究,为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果,采用L,.(45)正交试验设计,对影响ISSR-PCR的5个主要因素：Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板DNA和引物添加量进行5因素4水平的筛选分析,确定了小麦条锈菌ISSR-PCR反应的最适宜条件：在25μl PCR反应体系中包含有2.5μl 10×buffer,DNA模板90ng,2.5mmol/L Mg2+,0.20mmol/L dNTPs,0.40μmol/L引物,1 U Taq DNA酶.最佳退火温度因不同的引物而定,最佳循环次数为35次.利用优化好的ISSR-PCR扩增体系对小麦条锈菌进行扩增,获得2个特异性标记,回收特异性条带,经克隆测序后设计10对引物,将10对引物对小麦条锈菌及小麦叶部病原真菌扩增验证,获得1对特异性和稳定性好的SCAR标记引物.
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