【摘 要】
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Metridia荧光素酶(MLuc)因其分泌性及较高的热稳定性而成为较理想的报告基因之一,但在使用MLuc作为报告基因的过程中发现:细胞培养基的pH变化使其发光值产生较大波动、血清的存在导致其检测背景升高,从而影响对实验现象的判断.为了进一步探究细胞培养基对MLuc检测的具体影响并优化MLuc的检测条件,构建表达MLuc的逆转录病毒载体,制备MLuc,检测不同条件下的培养基对MLuc的影响,并尝试
【机 构】
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北京中医药大学中药学院,北京100102;中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室,北京100700
【出 处】
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中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会第六届换届大会暨第十八届全国学术交流会
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Metridia荧光素酶(MLuc)因其分泌性及较高的热稳定性而成为较理想的报告基因之一,但在使用MLuc作为报告基因的过程中发现:细胞培养基的pH变化使其发光值产生较大波动、血清的存在导致其检测背景升高,从而影响对实验现象的判断.为了进一步探究细胞培养基对MLuc检测的具体影响并优化MLuc的检测条件,构建表达MLuc的逆转录病毒载体,制备MLuc,检测不同条件下的培养基对MLuc的影响,并尝试通过不同缓冲液与试剂的组合代替培养基来修正上述问题.当以添加0.02％(v/v)NP-40的磷酸盐缓冲液(PBS()pH=7.4)代替培养基作为MLuc检测的缓冲体系时,其发光值大小相当,检测背景值由原来的600左右降低到20左右.结果表明添加0.02％(v/v)NP-40的PBS(pH=7.4)可消除细胞培养基的pH、血清对MLuc酶检测的影响,使检测结果更加准确和灵敏.
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