【摘 要】
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通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经E.caRV和xba I双酶切后连接构建真核表达质粒pVAX Ⅰ-P1-2A,将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验,结果酶切结果与预期目的条带大
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062 吉
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经E.caRV和xba I双酶切后连接构建真核表达质粒pVAX Ⅰ-P1-2A,将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验,结果酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果中经pVAX Ⅰ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,用免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖教和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05).间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。构建的真核表达质粒pVAX Ⅰ-P1-2A在小鼠免疫试验中重组质粒试验组能能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。
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