【摘 要】
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作为一种药食两用植物,苦荞(Fagopyrum tataricum)富含以芦丁为代表的黄酮类生物活性成分,黄酮醇合酶(Flavonol Synthase)是其合成途径的关键酶,其酶催特性及其表达调控对芦
【机 构】
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四川农业大学生命科学学院,四川雅安625014
【出 处】
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全国农业生物化学与分子生物学第十六届学术研讨会
论文部分内容阅读
作为一种药食两用植物,苦荞(Fagopyrum tataricum)富含以芦丁为代表的黄酮类生物活性成分,黄酮醇合酶(Flavonol Synthase)是其合成途径的关键酶,其酶催特性及其表达调控对芦丁的合成至关重要.本研究采用同源克隆技术获得FtFLS1、FtFLS2和FtFLS3苦荞黄酮醇合酶同源基因的cDNA和DNA序列,实现其在大肠杆菌中的可溶性表达;采用薄层层析技术(TLC)鉴定了3个重组酶的酶催活性,采用双倒数曲线法测定了它们对3种二氢黄酮醇的特征物理常数Km值;采用荧光定量PCR技术分析了黄酮醇合酶同源基因的组织表达特征;采用融合引物巢式PCR技术(FPN1-PCR)克隆了苦荞黄酮醇合酶同源基因启动子PFtFLS1、PFtFLS2和PFtFLS3,并通过瞬时转化技术验证其基本转录激活活性,采用稳定转化技术分析其组织特异性.
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