【摘 要】
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为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大
【机 构】
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中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所,善医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室，黑龙江哈尔演 150001
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为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大肠杆菌Rosetta高效表达VP1蛋白。经鉴定表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在，分子量为36.2 ku，免疫印迹实验表明获得的重组蛋白具有良好的反应原性。应用His．Bind亲和层析柱纯化重组蛋白后作为ELISA诊断包被抗原，建立间接ELISA方法。经反应条件优化确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL；待检血清最佳稀释倍数为1：100．其作用时间为60min；酶标二抗最佳稀释倍数为1：5000．其作用时间为30min；封闭液为8％的脱脂乳；显色时间为10min；阴阳性临界值为0.3。利用建立的方法对临床样品进行检测并与IFA作比对试验，结果表明该方法特异、敏感、重复性较好，适于PTV抗体检测。这为PTV抗体检测和流行病学调查提供了一种简便、快速的血清学检测方法。
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