【摘 要】
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G-四链体-血红素DNA酶是一种具有过氧化物酶活性的人工模拟酶。在H2O2存在条件下,G-四链体-血红素DNA酶能催化底物ABTS生成绿色产物ABTS·+。该显色反应快速灵敏被广泛应用于
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G-四链体-血红素DNA酶是一种具有过氧化物酶活性的人工模拟酶。在H2O2存在条件下,G-四链体-血红素DNA酶能催化底物ABTS生成绿色产物ABTS·+。该显色反应快速灵敏被广泛应用于可视化检测。然而,目前该酶存在催化活性偏低,且绿色产物ABTS·+易发生歧化而迅速褪色的缺陷1, 2。本课题组发现向该显色体系中加入适量铵离子不仅可以提高G-四链体-血红素DNA酶的催化活性,而且能够有效抑制产物ABTS·+的歧化,使得显色反应终产物长时间维持绿色。另外,我们还获得了ABTS·+的绿色固体结晶(高分辨质谱表征结果显示该结晶为ABTS·+),且该结晶溶解后仍可呈现稳定的绿色。我们对显色反应的G-四链体探针序列、反应缓冲液的主成分种类、离子种类、离子强度及pH值等一系列实验条件进行了优化,并将优化体系用于miRNA检测新方法的构建。结果显示采用优化后的显色反应体系可使检测下限提高1~2个数量级。
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