【摘 要】
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目的:寻找高效抑制P4502E1基因转录的位点,构建该位点的siRNA的表达载体.方法:参照HarborthJ的方法,选择siRNA的4个靶位点,用LineSilenceTMRNA干扰转录试剂盒产生PCR的扩增产物作为表达框架,直接转染E47细胞,产生siRNA抑制CYP4502E1基因转录,筛选高效抑制P4502E1基因表达的位点,以筛选出的高效位点构建BS/U6/CYP2E1表达质粒,转染E4
【机 构】
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郑州大学第一附属医院消化科,450052 重庆,第三军医大学西南医院感染科,400038
【出 处】
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第五届全国肝脏病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议
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目的:寻找高效抑制P4502E1基因转录的位点,构建该位点的siRNA的表达载体.方法:参照HarborthJ的方法,选择siRNA的4个靶位点,用LineSilenceTMRNA干扰转录试剂盒产生PCR的扩增产物作为表达框架,直接转染E47细胞,产生siRNA抑制CYP4502E1基因转录,筛选高效抑制P4502E1基因表达的位点,以筛选出的高效位点构建BS/U6/CYP2E1表达质粒,转染E47细胞,观察该质粒在E47细胞中发生RNAi的效果.结果:四个备选位点中1233～1251位点的抑制效率最高,并用该位点构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒有效地、特异地抑制CYP2E1基因的表达.结论:细胞色素P4502E1在人肝脏中含量最丰富,并且富集于肝小叶中心区域,在酒精性脂肪性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、药物代谢、药物性肝损害和肿瘤发生的研究中受到广泛关注.该基因的高表达增加了反应性氧物质(ROS)的产生致使脂质过氧化,最终导致肝细胞的损害、肝组织的炎症和纤维化,或是参与亚硝胺类和芳香族类化学致癌物的代谢活化,促进了肿瘤的发生.用PCR产物作为表达框架,在体内产生双链siRNA作为筛选高效的RNA干扰的位点的方法,即快速又简便.用该位点构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒可用于CYP2E1基因的功能研究、酒精性脂肪性肝病和非酒精性脂肪性肝病的发病机制及肿瘤发生的研究等领域中.
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