缢蛏微卫星标记的开发及通用性分析

来源 :2013年全国海水养殖学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ss1725
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采用磁珠富集和PCR筛选相结合的方法,快速分离含有微卫星核心的序列,共得到12对缢蛏的多态性微卫星引物.首先从缢蛏闭壳肌中提取基因组DNA,经酶切、接头连接、PCR扩增后,再采用生物素标记(CA) 16和(GA) 16探针对扩增产物进行杂交富集,经再次PCR扩增及T-A克隆,成功构建了缢蛏基因组微卫星富集文库.采用三引物PCR筛选法检测阳性克隆,挑取32个阳性克隆进行测序,其中21个含有微卫星序列,富集效率达到了65.62%。所有序列中完美型占52.38%,非完美型占33.33%,复合型占14.29%,可观察到的重复单元有CA、GA、TG、AC、AG、TACA、AAC、CAAG。对所有引物在近缘种长竹蛏、大竹蛏和小刀蛏的通用性情况进行了分析,结果显示:长竹蛏中,共有8对引物扩增出了相应大小的产物,位点SCl-7、SC1-12、SC4-4、SC4-6表现为单态,位点SC1-4、SC2-8、SC3-1、SC3-14表现出了高度多态;大竹蛏中,有8对引物可扩增出目的条带,位点SC1-12、SC3-1、SC3-14、SC4-4表现为单态,而位点SC3-4、SC3-7、SC4-6表现出了高度多态性,SC2-9为低态位点;小刀蛏中,共有7对引物扩增出了目的条带,位点SC1-12、SC3-4表现为单态,而位点SC1-7、SC2-9、SC3-4、SC3-14表现出了高度多态性,SC4-6为低态位点。
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