目的评价老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制。方法机械法分离1-4 d龄SD大鼠四肢长骨获得破骨细胞(osteoclast,OC),接种于24孔培养板中,在培养液中分别加入不同浓度的老鹳草素(10—10mol/L、10—9 mol/L、10-8 mol/L、10—7 mol/L)和Ⅱ型碳酸酐酶(carbonic anhydraseⅡ,CAⅡ)阻断剂乙酰唑胺(acetazolamide,Az)(10-6mol/L),应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate—resistant acid phosphatase,TRAP)染色技术,观察不同浓度老鹳草素对OC数量和融合指数的影响。应用免疫细胞化学技术ABC方法检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CAⅡ蛋白表达的影响。应用原位杂交技术检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CAⅡ工mRNA表达的影响。结果 1、老鹳草素呈浓度依赖性减少体外培养的TRAP染色阳性的多核细胞(成熟破骨细胞,mature osteoclast,mOC)和少于3个核的细胞(破骨细胞前体,pre—osteoclast,pOC)数目;2、老鹳草素呈浓度依赖性降低融合指数;3、免疫细胞化学结果显示老鹳草素呈浓度依赖性下调pOC和mOC中CAⅡ蛋白阳性单位的数量;4、原位杂交实验结果表明随着老鹳草素浓度的增加,OC数量逐渐减少,DAB染色变浅,阳性表达减少,呈浓度依赖性降低积光分度和阳性单位,升高平均灰度。结论老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素明显抑制体外培养OC的生成,下调OC中CAⅡ蛋白和mRNA的表达有关。