【摘 要】
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目的:克隆马鹿布氏杆菌ML分离株25kDa外膜蛋白(Omp25)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:运用RT-PCR技术从马鹿布氏杆菌分离株中扩增出Omp25基因,将其克隆入pMD18-T中进行核苷酸
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046
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目的:克隆马鹿布氏杆菌ML分离株25kDa外膜蛋白(Omp25)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:运用RT-PCR技术从马鹿布氏杆菌分离株中扩增出Omp25基因,将其克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定和遗传变异分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达.结果:该基因全长642bp,编码213个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽.在推导的氨基酸序列中,存在两个跨膜区,但没有潜在的N-联糖基化位点.与GenBank中布氏杆菌其他11个分离株相比,马鹿布氏杆菌分离株Omp25基因变异较小,以散在的点突变为主,Omp25基因核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.1-99.4 ％和99.2-99.5 ％之间.转化重组质粒pETOMP25的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出具有反应原性的目的蛋白,表达量占菌体蛋白的18.6％.结论:马鹿布氏杆菌分离株与流产型布氏杆菌其它分离株Omp25基因同源性很高,可能是一个毒力较强的野毒株.
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