【摘 要】
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[目的]Bt Cry8Ea2杀虫蛋白对华北大黑鳃金龟具有高杀虫活力,本研究通过比较正常饲喂和饲喂Cry8Ea2蛋白的华北大黑鳃金龟二龄幼虫中肠微生物菌群变化,揭示Cry8Ea2蛋白对微
【机 构】
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河北农业大学植物保护学院,河北保定071001北京农学院植物科学技术学院,北京102206
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[目的]Bt Cry8Ea2杀虫蛋白对华北大黑鳃金龟具有高杀虫活力,本研究通过比较正常饲喂和饲喂Cry8Ea2蛋白的华北大黑鳃金龟二龄幼虫中肠微生物菌群变化,揭示Cry8Ea2蛋白对微生物菌群的影响,为探讨Cry蛋白杀虫机理提供新思路.[方法]本研究通过中肠微生物宏基因组16S rDNA的PCR-RFLP分析.提取华北大黑鳃金龟幼虫中肠微生物宏基因组DNA,PCR扩增总16S rDNA,连接到T-载体上,转化E.coli,鉴定挑选含16S rDNA的阳性克隆.对阳性克隆所携带的16S rDNA进行PCR扩增,进行限制酶消化,分析酶切片段多态性.选取300个携带16S rDNA的阳性克隆,PCR-RFLP带型相同的克隆认定为相同克隆,对不同克隆的16S rDNA进行序列测定,与NCBI数据库进行对比分析,确定中肠微生物种属.[结果]正常饲喂的华北大黑鳃金龟幼虫中肠微生物种群含有35种细菌,优势细菌菌群为(Desulfosporosinus), 梭菌属(Clostridium)和芽孢杆菌属(Bacillus),其中5种细菌在NCBI数据库中尚无登记；饲喂的Cry8Ea2蛋白的华北大黑鳃幼虫中肠微生物种群检测出4种细菌,优势菌群为肠球菌属(Enterococcus)和链球菌属(Streptococcus).[结论]通过本研究发现正常饲喂的华北大黑鳃金龟二龄幼虫中肠微生物的菌群结构丰富.饲喂Cry8Ea2蛋白后,使中肠微生物的菌群结构发生了明显变化.饲喂Cry8Ea2蛋白中肠微生物菌群的多样性和丰度都有很大的差异性,这可能是由于Cry8Ea2蛋白对中肠内的pH值,离子环境产生影响,从而改变了中肠微生物的生境所引起的.
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