【摘 要】
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目的 探索缝隙连接阻断剂1-庚醇对生长分化因子-5 (growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)"自组装"成工程化软骨过程的影响以及其作用机制.方法 体外培养hMSCs,贴壁细胞传代,取第三代细胞,按一定密度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,以GDF
【机 构】
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华中科技大学附属协和医院骨科,武汉,430022 华中科技大学协和医院骨疾病研究所
【出 处】
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全国骨关节与风湿病暨第三届武汉国际骨科高峰论坛
论文部分内容阅读
目的 探索缝隙连接阻断剂1-庚醇对生长分化因子-5 (growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)"自组装"成工程化软骨过程的影响以及其作用机制.方法 体外培养hMSCs,贴壁细胞传代,取第三代细胞,按一定密度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,以GDF-5(100 ng/ml)和1-庚醇(2.5 umol/l)干预培养21天,采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测组织Ⅱ胶原和Cx43的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨蛋白多糖的表达.结果 自组装组织团块有类似于软骨的外观,Ⅱ型胶原mRNA表达明显,组织学显示Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达阳性.GDF-5(100 ng/ml)诱导21天后有明显Cx43蛋白的表达,1-庚醇对Cx43蛋白的表达没有作用；RT-PCR和免疫组化染色结果显示1-庚醇能够抑制Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达；甲苯胺蓝染色结果显示1-庚醇能够抑制蛋白多糖基质的合成.结论 应用"自组装"技术联合GDF-5能有效构建工程化软骨,Cx43蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯在"自组装"工程化软骨的构建过程中发挥着很重要的作用,并且这种软骨诱导作用能在一定程度上被1-庚醇阻断.
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