目的:研究鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备。方法:采用Trizol法提取DF-1细胞总RNA,反转录成cDNA,根据GenBank上公布的chTLR3基因序列设计特异性引物,克隆chTLR3胞外区部分基因片段,预计大小为1317 bp,并将其克隆于表达载体pET30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达;用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗chTLR3多克隆抗体后采用间接ELISA、Western-blot及体外瞬时转染法检测该兔抗chTLR3多克隆抗体的反应性和特异性。结果:经PCR扩增、1％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果显示,在1317 bp位置出现与预计片段大小相符的特异性单一条带。成功构建重组原核质粒pET30a-chTLR3并通过体外诱导表达,表达出大小约为58.8KD的重组蛋白。利用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得兔抗chTLR3多克隆抗体,经间接ELISA检测此多克隆抗体效价为1:216,经Western-blot及体外瞬时转染、间接免疫荧光法鉴定兔抗chTLR3多克隆抗体具有良好的特异性。表明成功制备效价高、特异性强的抗chTLR3多克隆抗体。结论:对Toll样受体功能的研究,有必要得到其相应的抗体。根据实验室的具体情况,自行制备了兔抗chTLR3多克隆抗体,作为研究chTLR3功能的辅助工具。本试验成功制备出效价高、特异性强的抗chTLR3多克隆抗体,为进一步探讨chTLR3参与病毒致鸡发病分子机制奠定了基础。