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目的:探讨不同剂量蟾毒灵(Bufalin)与羟基喜树碱(HCPT)联合用药对前列腺癌移植癌的抗肿瘤作用及其可能诱导凋亡的机制。方法:用人前列腺癌细胞DU 145进行细胞系及细胞培养,建立裸鼠人去势抵抗性前列腺癌移植瘤模型。分组给药:将裸鼠随机分为6组,每组6只,即阴性对照组(NS)、单药阳性对照组(H,B)、序贯给药组(H4B,H6B,H8B),序贯联合给药方式为羟基喜树碱腹腔注射后8小时使用相应剂量蟾毒灵。肿瘤形态学观察:将各组的裸鼠前列腺癌皮下移植瘤作形态学比较分析,TUNNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数,评价肿瘤细胞的凋亡程度。免疫组化法检测PNCA蛋白的表达:将各组瘤体作PNCA蛋白免疫组化染色,比较药物抑制PNCA蛋白表达作用。Western Blot检测蛋白印记:比较各组Bax、p53、pdcd4、GSK-3β等表达差异。结果:单药阳性对照组(H、B),序贯给药组(H4B、H6B、H8B)相对于阴性对照组(NS)都能明显减小肿瘤的体积,其中H6B、H8B两组较之阳性对照组(H、B),能更显著的减小肿瘤大小,显示出更高的肿瘤移植率,具有统计学差异。HE染色下细胞形态变化显示,给药组较NS组明显促进肿瘤细胞的死亡,而联合序贯给药组H6B组和H8B组可见明显的形态学改变。TUNNEL法结果显示,各组较之NS对照组差异均有统计学意义,H6B、H8B组相对于阳性对照组(H、B)更明显的促进细胞凋亡,其中H6B组效果更明显。免疫组化检测结果显示:给药各组较之阴性对照组降低了裸鼠前列腺癌皮下移植瘤内蛋白PNCA的含量,类似的H6B、H8B组效果更显著,H6B组效果最好。结论:两药序贯给药在动物实验中证实了协同作用的存在,同时我们发现联合药物剂量的选择对肿瘤的抑制也有很大影响,2mg/kg羟基喜树碱联合8h后使用0.6mg/kg蟾毒灵的序贯给药方式效果最好。对于药物的相关机制,我们认为联合序贯给药对于促进肿瘤凋亡,与线粒体凋亡途径、凋亡调控途径密切相关。