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目的：
本实验通过建立耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)损伤的动物模型,将神经干细胞(neural stem cells,NSCs)进行耳蜗底转鼓阶移植,并观察移植干细胞向神经元分化的比例,探讨SGNs损伤后的微环境对移植干细胞的影响。
方法：
24只250-300g SD大鼠(雌雄不拘)随机分为两组：ouabain耳蜗给药++NSCs移植组((A组)；正常耳蜗NSCs移植组((B组).A组动物麻醉后行第一次听性脑干反应测听(auditory brainstemresponse, ABR)，测听结束后手术暴露左侧耳蜗，行ouabain经圆窗完给药，造成SGNs损伤的动物模型.Ouabain给药后2d，行第二次ABR测听，完毕后行二次手术，在左侧耳蜗底转鼓阶处钻孔，将携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)的NSCs经小孔注入.NSCs移植后7d，行第三次ABR测听，测听后行动物灌注、耳蜗切片，免疫荧光法观察SGNs损伤情况、以及GFP(+) NSCs向神经元的分化比例.B组动物行GFP(+) NSCs鼓阶移植，7d后动物灌注，免疫荧光法观察GFP (+)NSCs向神经元的分化比例.
结果：
(1)ABR测听：ouabain给药后2d，实验耳听闭较给药前明显上移，达到90dB SPL以上，呈极重度听力损失；NSCs移植7d后，听闺没有明显恢复.
(2)动物模型鉴定：免疫荧光结果均证实，ouabain经圆窗盒给药，可特异性的损伤SGNs，而内、外毛细胞、及雪旺细胞等耳蜗其他细胞不受影响。
(3)SGNs损伤后的微环境对于NSCs分化的影响：免疫荧光结果证实，ouabain耳蜗给药++NSCs移植组((A组)中，较多的外源性GFP(+)NSCs在螺旋神经节附近显示为MAP2阳性(一种成熟的神经元标记物)；然而，正常耳蜗NSCs移植组((B组)中，螺旋神经节附近的外源性NSCs仅有少数表现为MAP2阳性。
讨论
Ouabain耳蜗局部给药，可建立起SGNs损伤的动物模型，该方法特异性的损伤SGNs，并造成极重度听力损失.SGNs损伤后的微环境内有更多的外源性移植NSCs分化为神经元，提示SGNs损伤后的微环境内有特定的分子发生改变，并发挥了促进NSCs向神经元分化的作用。找到这些特定的分子，阐明它们促进NSCs分化的分子机制，有利于使干细胞移植治疗突破瓶颈，获得较好的疗效.
本实验通过建立耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)损伤的动物模型,将神经干细胞(neural stem cells,NSCs)进行耳蜗底转鼓阶移植,并观察移植干细胞向神经元分化的比例,探讨SGNs损伤后的微环境对移植干细胞的影响。
方法：
24只250-300g SD大鼠(雌雄不拘)随机分为两组：ouabain耳蜗给药++NSCs移植组((A组)；正常耳蜗NSCs移植组((B组).A组动物麻醉后行第一次听性脑干反应测听(auditory brainstemresponse, ABR)，测听结束后手术暴露左侧耳蜗，行ouabain经圆窗完给药，造成SGNs损伤的动物模型.Ouabain给药后2d，行第二次ABR测听，完毕后行二次手术，在左侧耳蜗底转鼓阶处钻孔，将携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)的NSCs经小孔注入.NSCs移植后7d，行第三次ABR测听，测听后行动物灌注、耳蜗切片，免疫荧光法观察SGNs损伤情况、以及GFP(+) NSCs向神经元的分化比例.B组动物行GFP(+) NSCs鼓阶移植，7d后动物灌注，免疫荧光法观察GFP (+)NSCs向神经元的分化比例.
结果：
(1)ABR测听：ouabain给药后2d，实验耳听闭较给药前明显上移，达到90dB SPL以上，呈极重度听力损失；NSCs移植7d后，听闺没有明显恢复.
(2)动物模型鉴定：免疫荧光结果均证实，ouabain经圆窗盒给药，可特异性的损伤SGNs，而内、外毛细胞、及雪旺细胞等耳蜗其他细胞不受影响。
(3)SGNs损伤后的微环境对于NSCs分化的影响：免疫荧光结果证实，ouabain耳蜗给药++NSCs移植组((A组)中，较多的外源性GFP(+)NSCs在螺旋神经节附近显示为MAP2阳性(一种成熟的神经元标记物)；然而，正常耳蜗NSCs移植组((B组)中，螺旋神经节附近的外源性NSCs仅有少数表现为MAP2阳性。
讨论
Ouabain耳蜗局部给药，可建立起SGNs损伤的动物模型，该方法特异性的损伤SGNs，并造成极重度听力损失.SGNs损伤后的微环境内有更多的外源性移植NSCs分化为神经元，提示SGNs损伤后的微环境内有特定的分子发生改变，并发挥了促进NSCs向神经元分化的作用。找到这些特定的分子，阐明它们促进NSCs分化的分子机制，有利于使干细胞移植治疗突破瓶颈，获得较好的疗效.