【摘 要】
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目的：研究成牙本质细胞中BMP2调控DSPP基因转录的具体分子机制.方法：构建含有不同长度DSPP基因启动子片段的荧光素酶报告质粒：p1318、p591和p318,以及DLX3、OSX高表达质粒：pcDNA-DLX3和pcDNA-OSX.使用重组BMP2诱导MD10-F2细胞不同时间段后,western检测细胞内DLX3、OSX和DSP表达.高表达DLX3、OSX以及使用DLX3 SiRNA抑制D
【机 构】
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口腔医学教育部重点实验室(武汉大学),武汉大学口腔医院,武汉大学口腔医学院 美国德州大学圣安东尼奥
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目的：研究成牙本质细胞中BMP2调控DSPP基因转录的具体分子机制.方法：构建含有不同长度DSPP基因启动子片段的荧光素酶报告质粒：p1318、p591和p318,以及DLX3、OSX高表达质粒：pcDNA-DLX3和pcDNA-OSX.使用重组BMP2诱导MD10-F2细胞不同时间段后,western检测细胞内DLX3、OSX和DSP表达.高表达DLX3、OSX以及使用DLX3 SiRNA抑制DLX3后检测DLX3、OSX和DSP的表达.使用双荧光素酶报告基因系统检测DLX3和OSX对DSPP基因启动子的启动活性.使用EMSA和CHIP检测DSPP基因启动子上DLX3和OSX的结合位点.使用蛋白免疫沉淀检测DLX3和OSX是否有相互作用.结果：MD10-F2细胞中,BMP2可诱导DLX3、OSX和DSP表达.高表达DLX3可使OSX、DSP高表达,抑制DLX3表达后可抑制OSX和DSP的表达；高表达OSX仅使DSP高表达,而不影响DLX3表达. DLX3和OSX可以增强p318 DSPP基因启动子活性.在DSPP基因启动子上发现了2个DLX3结合位点(-228 ～-221,-68～-64)和1个OSX结合位点(-148 ～-143).删除DSPP基因启动子上DLX3和OSX结合位点后,可减弱DLX3和OSX对DSPP基因的启动.DLX3和OSX在细胞内有相互作用.结论：在成牙本质细胞中发现了一条新的BMP2调控DSPP的信号通路：BMP2可以诱导DLX3表达,DLX3可诱导OSX表达. DLX3和OSX可以和DSPP启动子上特定结合位点结合,同时DLX3和OSX可以相互作用形成蛋白复合体,启动DSPP基因的转录.
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