【摘 要】
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随着奶牛集约化养殖程度不断提高，奶牛病毒性疾病的感染率也在逐年上升牛干扰素α(Bovine interferon-α,BoIFN-α)原始基因在重组大肠杆菌中多以包涵体形式表达,为在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达的具有活性的重组BoIFN-α,在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏好性对BoIFN-α基因进行子优化.将优化后的BoIFN-α成熟蛋白基因分别克隆到表达载体pET
【机 构】
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上海市农业科学院,上海201106;上海市奶牛研究所,上海200436 上海市奶牛研究所,上海20
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医内科与临床诊疗学分会第八届代表大会暨学术研讨会
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随着奶牛集约化养殖程度不断提高，奶牛病毒性疾病的感染率也在逐年上升牛干扰素α(Bovine interferon-α,BoIFN-α)原始基因在重组大肠杆菌中多以包涵体形式表达,为在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达的具有活性的重组BoIFN-α,在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏好性对BoIFN-α基因进行子优化.将优化后的BoIFN-α成熟蛋白基因分别克隆到表达载体pET-28a、PET30a和pColdⅡ载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.优化后的BoIFN-α基因在3种载体中均获得可溶性表达,但以在载体pColdⅡ中获得的可溶性表达量最高.对重组菌rBoIFN-α-pColdⅡ/BL21的表达条件进行优化,在IPTG浓度为0.64 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为9h的条件下,可溶性目的蛋白的表达量最高,达36 mg/L菌液.重组BoIFN-α在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1×106 U/mg.
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