【摘 要】
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本实验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的100个EST序列中选取一个带有polyA尾的序列,经5RACE得到此序列的全长基因,命名为RhHp2,基因全长1002bp,开放阅读框(ORF)从31bp
【机 构】
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中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,上海,200232
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2004年学术年会
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本实验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的100个EST序列中选取一个带有polyA尾的序列,经5RACE得到此序列的全长基因,命名为RhHp2,基因全长1002bp,开放阅读框(ORF)从31bp至879bp,共848bp,,编码282个氨基酸.经序列分析,RhHp2基因与其它序列在核苷酸水平上基本无同源性,但在氨基酸水平上同源性最高可达50.81％.RhHp2基因连接于PET32a(+)载体后克隆于表达菌BL21,1mMIPTG诱导表达,产生分子量约为55kD的融合重组蛋白,并以不溶性包涵体形式存在.经纯化和体外复性的重组蛋白三次免疫新西兰兔,并收集相应的兔抗血清.经Westernblot分析,重组蛋白可特异地与兔血清抗体结合.三次免疫后,将镰形扇头蜱未吸血成蜱和若蜱接种于兔耳,初步研究发现蜱的吸血行为受到一定影响.此结果表明RhHp2基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用.RT-PCR分析,RhHp2基因在镰形扇头蜱各发育阶段的表达丰度存在差异.上述结果暗示RhHp2基因可在原核体系中表达,表达产物具有一定的免疫活性.此基因的其它功能尚在进一步研究中.
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