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利用PCR 方法扩增得到目的片段，并引入FLAG 标签序列(DYKDDDDK)，构建重组表达质粒pET28a-E-I/II.转化至BL21(DE3)中，经IPTG 诱导表达目的蛋白质，并对其进行SDS-PAGE 分析和Western-blot 鉴定.
鹅坦布苏病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域和FLAG标签的融合表达
【摘 要】
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利用PCR 方法扩增得到目的片段，并引入FLAG 标签序列(DYKDDDDK)，构建重组表达质粒pET28a-E-I/II.转化至BL21(DE3)中，经IPTG 诱导表达目的蛋白质，并对其进行SDS-PAGE 分析和Western-blot 鉴定.
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京 210014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
【发表日期】
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2013年11期
其他文献
为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的免疫原性,本试验构建了表达质粒pET32a-E,表达的E蛋白大小约为48KD,Western-blot 分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应。
根据鹅坦布苏病毒JS804 株非结构蛋白NS1 基因序列,设计一对特异性引物,利用PCR 方法扩增得到完整的NS1 基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a 和pET32a 上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG 诱导得到NS1 融合蛋白(His-NS1),其分子质量约分别为44kD 和58kD,均在诱导后6h 达到表达量高峰。
会议
为建立快速检测鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)抗体的血清学方法,以及对鸭坦布苏病毒病进行血清流行病学调查,本研究以原核表达纯化的鸭坦布苏病毒ED3 蛋白为包被抗原,建立了检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA 诊断方法。
会议
为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况，本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1 蛋白的基础上，建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA 方法。
本研究以鹅坦布苏病毒(goose Tembusu virus,GTMUV)囊膜蛋白(Envelope,E)基因序列为基础,采用Garnier_Robson 方法、Chou_Farplus 方法和Karplus_Schulz 方法预测了其结构蛋白的二级结构。用Kyte_Doolittle 方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini 方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson_Wolf 方法
会议
为建立快速检测鸭坦布苏病毒病抗体的血清学方法本研究利用鹅坦布苏病毒JS804 株非结构蛋白NS1基因序列将其克隆至原核表达载体pET32a 上,建出重组表达pET32a-NSI,转化至BL21(DE3)中。
会议
为了解我国鸡群感染禽坦布苏病毒的情况，应用已建立的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)对于2010 年12 月-2013 年9 月近三年内采自福建、江西、浙江、广东四省发生产蛋异常鸡场的开产蛋鸡、后备蛋鸡的血样共2310 份进行禽坦布苏病毒抗体的检测，并对结果进行了分析。
会议
禽坦布苏病毒病是新发的可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的一种疫病。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅坦布苏病毒JS804株全基因序列，设计了2对特异性引物，建立了禽坦布苏病毒套式RT-PCR检测方法。
会议