论文部分内容阅读
目的:探讨肝纤维化向肝硬化发展阶段肝脏卵原细胞的分化取向。方法:Fisher 344大鼠32只,随机分为正常组（n=5）和模型组（n=27）,模型大鼠以50%CCl4橄榄油溶液3ml·kg-1皮下注射制备肝硬化模型,8w末处死模型大鼠3只作动态观察。从第9w起模型大鼠随机分为模型对照组（n=8）、2-乙酰氨基芴（2-AAF）低剂量组（n=8）、2-AAF高剂量组（n=8）,各组在予以相应的试剂剂量灌胃的同时,继续予20%CCl4橄榄油溶液皮下注射,模型对照组及正常组大鼠予以等体积的蒸馏水灌胃,12w末处死取材,观测各组大鼠的肝功能、肝组织病理、肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量的变化。免疫组化观察肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（typeⅠCollagen,ColⅠ）、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ColⅣ）等肝纤维化相关指标以及肝脏卵圆细胞标记物CK7、CK18、CK19及OV6等的表达。结果:（1）肝功能检测显示,8w时模型大鼠血清ALT、AST活性及TBil含量显著升高（P<0.01）,血清Alb含量显著降低（P<0.01）;12w时随着CCl4注射剂量的减少,模型对照组、2-AAF高、低剂量组ALT、AST活性较8w时有所降低,但仍显著高于正常组（P<0.01）。（3）肝组织Hyp含量造模8w时著升高（P<0.01）;12w模型对照组、2-AAF低剂量组、2-AAF高剂量组均显著高于8w模型组（P<0.01）,且2-AAF低剂量组、2-AAF高剂量组显著高于12w模型对照组（P<0.05或P<0.01）。（4）HE染色显示模型对照组大鼠肝细胞广泛的脂肪变性及大量的纤维间隔形成,并伴有大量的炎性细胞浸润;2-AAF高、低剂量组除形成大量的纤维间隔外,可见卵圆形细胞广泛分布与假小叶内,尤以高剂量组最为典型。天狼猩红胶原染色显示,模型对照组、2-AAF高、低剂量组大鼠肝组织均已形成大小不等的假小叶结构,全部形成典型的肝硬化,其差别在于模型对照组大鼠肝组织胶原纤维粗大致密,假小叶内少见胶原沉积;2-AAF组除形成粗大的纤维间隔外,假小叶内亦可见广泛的胶原沉积。（5）免疫组化显示,8w时模型大鼠肝组织α-SMA、ColⅠ、ColⅣ表达显著增加,CK7、CK18、CK19、0V6主要表达于新生胆管以及纤维间隔的肌成纤维样细胞,尤其OV6在纤维间隔的表达最为明显。12w时,模型对照组大鼠CK7、CK18、CK19、OV6主要表达于纤维间隔内的肌成纤维样细胞及新生胆管,假小叶内少见CK7、CK18、CK19、OV6阳性细胞;2-AAF组肝组织CK7、CK18、CK19、OV6阳性细胞明显增加,表达部位除纤维间隔内的肌成纤维样细胞、新生胆管外,假小叶内亦有大量的表达,主要为新生的肝细胞及肌成纤维样细胞。结论:（1）在肝纤维化向肝硬化进展阶段予以2-AAF干预可成功诱导肝脏卵原细胞的增殖及分化,是观察肝硬化形成阶段肝脏卵原细胞分化取向的良好动物模型;（2）该研究明确显示肝纤维化向肝硬化进展阶段阶段,肝卵圆细胞主要向肌成纤维细胞分化,是促进肝纤维化进展的关键病理因素之一,调控肝卵圆细胞的分化方向对于肝纤维化肝硬化的治疗具有重要的临床意义。