去甲基化药物治疗MLL基因阳性难治复发急性白血病的分子机制

来源 :全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a6443064
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  目的:伴有MLL基因异常(染色体11q23)的急性白血病多数预后不良,其中MLL-AF4阳性的急性淋巴细胞白血病属于预后最差的一类白血病,该类白血病出现t (4; 11) (q21; q23)染色体异常,形成MLL-AF4融合基因,对化疗耐药,即使移植后也容易复发,是血液病研究的焦点.其发病机理不清,也缺乏有效的靶向治疗措施.本实验拟研究去甲基化药物治疗MLL基因阳性难治复发急性白血的分子机制及microRNA参与MLL-AF4基因异常急性白血病的发病机理.方法:去甲基化药物处理MLL-AF4阳性的白血病细胞系,发现去甲基化处理后上调的microRNA.筛选可能调控MLL-AF4的microRNA.采用PCR方法从一例健康供者DNA中扩增AF4基因3UTR序列,插入经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.突变体荧光素酶报告实验、RT-PCR及western blot进一步证实起作用的microRNA.CCK-8、Annexin V/7AAD、caspase3、8、9、CD133证明这些microRNA可以影响MLL-AF4白血病的生物学行为.启动子活性分析、CHIP等分析MLL-AF4融合基因是否调控microRNA表达.结果:去甲基化药物处理后miR-143表达可以上调.成功构建了含有1935bp、2104bp和1371bp的AF4基因3UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-AF4-3UTR,并通过酶切及基因测序方法的鉴定.荧光素酶活性实验证实miR-143组荧光素酶活性明显低于对照组.突变体荧光素酶报告实验、RT-PCR及western blot进一步证实miR-143可以靶向调控MLL-AF4. 而且,miR-143可以引起MLL-AF4阳性白血病细胞出现明显凋亡,增殖受抑.证实miR-143可能成为未来MLL-AF4阳性急性白血病治疗的靶点.同时MLL-AF4融合基因可以靶向性的引起miR-143启动子区高甲基化,抑制表达,从而进一步激活MLL-AF4原癌基因的活性.结论:MLL-AF4阳性急性白血病中,miR-143特异性调控MLL-AF4原癌基因,同时MLL-AF4可以靶向性的引起miR-143启动子区高甲基化,抑制表达,从而进一步激活MLL-AF4原癌基因的活性.去甲基化药物可以上调miR-143,抑制MLL-AF4原癌基因,诱导细胞凋亡,达到治疗MLL-AF4白血病的目的.
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