【摘 要】
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目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础.方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELI
【机 构】
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福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州350013
【出 处】
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福建省第十届猪病学术研讨会暨猪产业高峰论坛
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目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础.
方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率.
结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37℃孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37℃孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38).
结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.
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