引言/目的口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的牛、羊、猪等家畜和象、牦牛、梅花鹿等野生偶蹄动物发生的一种急性、热性、高度接触性传染病,给我国畜牧业造成巨大的经济损失,严重危害畜牧业的发展。因此对口蹄疫的快速、准确诊断是控制疫情蔓延扩散的必要前提,也是制定畜牧免疫计划的基础。本研究建立我国口蹄疫流行株不同血清型RT-PCR的鉴别诊断技术,为口蹄疫的防控提供有力的技术支持。材料与方法参考GenBank中的A型、O型、Asia1型FMDV的全基因组核酸序列,进行比对,确定保守区和变异区。采用Primer 5.0设计A型、O型、Asia1型FMDV的通用引物及分型引物,优化FMDV通用、分型RT-PCR的反应体系及反应条件,结合DNA测序技术对引物的特异性和广谱性进行分析。结果与讨论FMDV通用引物均能特异性扩增A型、O型、Asia1型FMDV,扩增目的目的片段与预期大小一致为457bp。分型引物仅能扩增相应A型、O型、Asia1型FMDV,扩增的目的片段分别为320bp、240bp、460bp。通过对扩增片段进行测序分析及Blast比对,分型引物扩增到的序列与相应的血清型FMDV相符,相似性达84~99%。本研究所建立的FMDV鉴别诊断方法,在FMDV通用型检测具有广谱性,在分型检测具有特异性,可有效检出我国2013年大流行的A型FMDV;能快速判断临床样品是否感染FMDV,并能进行血清型分型,可应用于FMDV急性及亚临床感染的诊断及流行病学调查。结论建立了我国口蹄疫流行血清型RT-PCR的鉴别诊断技术,为口蹄疫病毒临床样品的检测、流行病学的调查奠定了基础。