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目的:通过体外角质形成细胞(KC)培养法测定不同浓度薄荷醇对角质形成细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响, 并通过电镜扫描了解不同浓度薄荷醇作用下细胞形态结构的变化,研究薄荷醇对 KC 的毒性反应;采用流式细胞仪检测不同浓度薄荷醇对 KC 细胞内 Ca2+浓度的影响来推测毒性发生的机制。方法:(1)系列浓度薄荷醇作用于 KC,0.1%二甲基亚砜(DMSO) 为溶剂对照,新鲜 DMEM 完全培养基作为空白对照。作用24h 后按说明书进行操作,检测细胞内 LDH 释放率。(2)收集不同浓度薄荷醇作用于24h 的 KC 细胞,制备扫描电镜样本。观察 KC 表面形态的改变。(3)利用流式细胞仪(FCM)结合 Fluo-3/AM 染色技术,半定量检测不同浓度薄荷醇对 KC 内 Ca2+浓度的影响。结果:在不同浓度薄荷醇作用下,KC 的 LDH 释放率除浓度为 950μmol/L 时,其余所有系列浓度薄荷醇作用的 KC 细胞 LDH 释放率均≤6%,450μmol/L~1200μmol/L 组与溶剂对照组比较有显著性差异(P<0.05),1400μmol/L 和1600μmol/L 组与溶剂对照组比较。差异无统计学意义(P>0.05)。在浓度为950μmol/L 时,其 LDH 释放率突然增高,为(33.31±8.62)%。通过电镜扫描发现,除浓度为950μmol/L 组的 KC 表面形态发生凹陷、变形外,其余各组均未发生变化,且组间无明显差异。与溶剂对照组比较,除450 u mol/L浓度组外,其余各组不同浓度薄荷醇作用的 KC 内荧光强度发生右移,且组间存在显著性差异(P<0.05)。而450μmol/L 浓度组对细胞内 Ca2+浓度影响不明显。结论:薄荷醇在950μmol/L 浓度时,KC 的 LDH 释放率增加明显;同时,电镜扫描结果显示在该浓度下 KC 变形较多。而其他各组 LDH 释放率较低,未见变形的 KC。结果提示薄荷醇对 KC 内 Ca2+浓度有一定的影响。实验结果提示薄荷醇对 KC 损伤程度很低,但为什么在950μmol/L 浓度时损伤程度较高、细胞变形较多,其原因有待于进一步研究。除450μmol/L 浓度组外,其余各组不同浓度薄荷醇均促进 KC 内 Ca2+浓度增加:且随薄荷醇浓度增加,Ca2+浓度呈相应增加。由此可以推测薄荷醇对 KC 作用机制、毒性机理与 Ca2+密切相关。