【摘 要】
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目的 探究吴茱萸碱(Evodi amine,EVO)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化的抑制作用及其相关分子机制.方法 实验分为正常对照组,溶媒组(终浓度为5％的DMSO),EVO单独处理组(50uM),LPS模型组(10ug/ml),EVO (50uM) +LPS (10ug/ml)组,EVO (20uM) +LPS (10ug/ml)组.LPS作用12h后,收集细胞团块及细胞培养上清.通过酶联
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【出 处】
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世界中医药学会联合会急症专业委员会第三届学术年会、第三届国际中西医结合急救医学学术大会暨中西医结合心血管病规范化治疗研讨
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目的 探究吴茱萸碱(Evodi amine,EVO)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化的抑制作用及其相关分子机制.方法 实验分为正常对照组,溶媒组(终浓度为5％的DMSO),EVO单独处理组(50uM),LPS模型组(10ug/ml),EVO (50uM) +LPS (10ug/ml)组,EVO (20uM) +LPS (10ug/ml)组.LPS作用12h后,收集细胞团块及细胞培养上清.通过酶联免疫吸附法(ELISA)及实时荧光定量PCR (RT-PCR)分别检测细胞培养上清中炎症因子IL-1,IL-6和TNF-α的蛋白及mRNA表达水平.为了进一步探讨EVO分子作用机制,收集LPS作用2h后的细胞团块,利用Western blot检测细胞中NF-κB相关信号通路分子的蛋白表达水平,并采用凝胶迁移实验(EMSA)检测细胞核中NF-κB的DNA结合活性.结果 与LPS单独处理组相比,EVO能显著降低LPS作用下巨噬细胞中IL-6,IL-1 β,TNF-α的mRNA及蛋白水平.EMSA结果显示EVO可抑制LPS诱导的NF-κB的DNA结合活性,同时Western blot结果表明EVO对IκBa蛋白的降解以及IκBα磷酸化水平均具有抑制作用.结论 吴茱萸碱对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化具有显著的抑制效应,并且该作用可能通过下调IκBα磷酸化水平,阻止IκBa蛋白的降解,进而抑制NF-κB的DNA结合活性来实现.
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