【摘 要】
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目的:评价以PCR为基础的分子鉴定技术对分枝杆菌快速鉴定的价值. 方法: 21种分枝杆菌参考菌株与143株临床分离株16S～23SrDNA间隔区(IGS)序列,以引物a进行PCR扩增,并经限制
【机 构】
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解放军第三零九医院结核病研究室,北京,100091
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目的:评价以PCR为基础的分子鉴定技术对分枝杆菌快速鉴定的价值.
方法: 21种分枝杆菌参考菌株与143株临床分离株16S～23SrDNA间隔区(IGS)序列,以引物a进行PCR扩增,并经限制性内切酶HaeⅢ(或MSPI)消化反应.结核分枝杆菌寡核苷酸探针A和250bprDNA探针的敏感性与特异性试验,脓肿分枝杆菌与偶然分枝杆菌寡核苷酸探针特异性试验.22种46株分枝杆菌PCR扩增产物直接测序,并用Clustal程序处理分析.
结果:分枝杆菌一般扩增出1～2条带,80％缓慢生长分枝杆菌片段大小集中在340～400 bp,快速生长分枝杆菌在470～575bp.PCR扩增产物直接电泳分析,42％受试菌株鉴定到种,若结合RFLP分析,18种受试菌株(86％)可以被分开;用引物b扩增,结核分枝杆菌复合体亦能鉴别开.寡核苷酸探针A分别检测基因组DNA、PCR扩增产物的敏感性为220ng、14ng;250bp rDNA探针分别与基因组DNA、PCR扩增产物250 bp杂交,其敏感性为300pg、100pg.250bp rDNA探针直接检测基因组DNA,仅区别分枝杆菌与非分枝杆菌;检测PCR扩增产物,寡核苷酸探针A只与结核分枝杆菌呈阳性反应,250bp rDNA探针与结核分枝杆菌、胃分枝杆菌呈阳性反应.受试3种寡核苷酸探针特异性强.IGS测序,除结核分枝杆菌复合体外,受试菌株鉴定到种.
结论: 16S～23SrDNA间隔区(IGS)序列PCR-RFLP分析,必要时结合寡核苷酸(或250bprDNA)探针杂交或以PCR扩增产物直接测序是分枝杆菌快速分子鉴定的一种有效途径.
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