【摘 要】
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[研究目的]大量的研究表明双链RNA可以诱导对虾产生抗病毒免疫,但是对虾RNA干扰相关基因在双链RNA刺激下的应答机制目前仍缺乏相应研究.不同序列特异性的双链RNA所诱导的抗病毒免疫力存在巨大差别,目前也没有较为合理的解释.本研究的目的就是初步解答这两个问题.[方法和过程]通过体外转录的方法制备六种类型的双链RNA,转录的模板分别是凡纳滨对虾的Rab7、Dicer 2、Hemocyanin、CDP
【机 构】
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西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌,712100
【出 处】
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2012年全国博生研究生学术论坛——可持续的水产养殖：理论与实践
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[研究目的]大量的研究表明双链RNA可以诱导对虾产生抗病毒免疫,但是对虾RNA干扰相关基因在双链RNA刺激下的应答机制目前仍缺乏相应研究.不同序列特异性的双链RNA所诱导的抗病毒免疫力存在巨大差别,目前也没有较为合理的解释.本研究的目的就是初步解答这两个问题.[方法和过程]通过体外转录的方法制备六种类型的双链RNA,转录的模板分别是凡纳滨对虾的Rab7、Dicer 2、Hemocyanin、CDP和Dicer 1基因及黄牛的IFNG基因.将这六种双链RNA分别注射到凡纳滨对虾肌肉中(实验用虾体重为6-9g,每只虾注射7μg),于注射后的第24、48h取各处理组对虾的鳃、肌肉和肝胰腺等组织,并提取总RNA.用荧光实时定量的方法检测各处理组样品中RNA干扰相关基因(Sid 1,Dicer 2,Ago 2等)及被沉默基因的表达变化情况.[结果](1)与Dicer 2和Ago 2基因相比,Sid 1对于双链RNA的刺激更为敏感.(2)与其他四种双链RNA相比,Rab7-dsRNA和Dicer 2-dsRNA能够使RNA干扰相关基因更大程度的上调.(3)基因被沉默的效率既与其表达量有关,也与其是否直接或间接参与RNA干扰反应有关.[结论]不同序列特异性的双链RNA诱导对虾抗病毒免疫都有赖于RNA干扰通路,但是可能存在3种模式：IFNG-dsRNA这一类的双链RNA仅能在较低水平上上调RNA相关基因,因而诱导的抗病毒免疫力较弱；干扰Rab7等直接或间接参与RNA干扰反应的基因会使RNA干扰相关基因的表达量大幅度上调,因而诱导的抗病毒免疫力更强；针对病毒重要基因的双链RNA在序列特异性上与IFNG-dsRNA等无异,但因为能够直接抑制病毒的复制,所以也能够为对虾提供较强的保护作用.
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