【摘 要】
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目的 研究高脂饮食引起的高胆汁酸参与肠道菌群紊乱的机制.方法 将SD大鼠分成对照组(普通饮食)、高脂饮食组、高脂饮食+考来烯胺(肠道胆汁酸螯合剂,6％混合于高脂饮食中)组
【机 构】
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200080 上海交通大学附属第一人民医院消化科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 研究高脂饮食引起的高胆汁酸参与肠道菌群紊乱的机制.方法 将SD大鼠分成对照组(普通饮食)、高脂饮食组、高脂饮食+考来烯胺(肠道胆汁酸螯合剂,6％混合于高脂饮食中)组和胆酸(0.051％混合于普通饮食中)组.采用Illumina MiSea分析肠道菌群构成.采用实时荧光定量PCR法检测潘氏细胞分泌防御素5和6的基因表达.采用Western印迹法分析潘氏细胞分泌溶菌酶的蛋白表达.采用流式细胞技术检测溶菌酶阳性的潘氏细胞在分离的小肠隐窝细胞中的比例.应用电子显微镜观察潘氏细胞的超微结构的变化.为了提供胆汁酸直接作用于潘氏细胞的证据,采用小肠Enteroid(干细胞分化的肠道样组织,不受肠道菌群和免疫细胞作用)离体培养技术,将Enteroid与胆酸共培养72 h,检测防御素的变化以明确胆酸对潘氏细胞抗菌肽功能的影响.结果 两周高脂饮食导致大鼠回肠黏膜组织菌群结构紊乱,降低了乳酸杆菌水平,升高了消化链球菌、假单胞菌和链球菌的结构比例,而同时给予考来烯胺则逆转了以上菌群的改变(P＜0.05).对高脂饮食组大鼠分离的回肠隐窝细胞的基因检测发现,防御素5和6分别降低了68％和45％；对蛋白的检测则发现溶菌酶的表达降低了35％；流式细胞学分析进一步揭示,高脂饮食组潘氏细胞占小肠隐窝细胞的比例下降了39％.而考来烯胺处理组则逆转了防御素的降低和潘氏细胞数目的 减少(P＜0.05).以上检测结果在胆酸处理组类似于高脂饮食组.电子显微镜结果显示高脂饮食致潘氏细胞嗜酸性分泌颗粒明显减少,而考来烯胺处理组则与对照组无明显差异.在离体Enteroid培养中,72 h胆酸处理明显降低了防御素5和6的基因表达(P＜0.05),给予G蛋白耦联的胆汁酸受体1(TGR5或GPBAR1)抗体则可逆转以上变化(P＜0.05).结论 高脂饮食增加了肠腔内胆汁酸浓度,通过表达在潘氏细胞的TGR5受体途径降低了潘氏细胞的数量,下调了其抗菌肽的生成.此机制参与了高脂饮食所致的肠道菌群紊乱及黏膜炎性反应和代谢性内毒素血症的发生.
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