【摘 要】
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采用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)原理,根据PCV2的Cap基因设计一组交叉扩增引物,用构建的Cap基因重组质粒作为标准DNA模板,对反应体系的引物浓度、Betaine、MgSO4、dNTP、Bst酶、反应温度和时间进行优化,并结合核酸试纸条技术,建立一种简便、快速、准确的现场可视化检测PCV2的交叉引物恒温扩增检测方法(PCV2-CPA).
【机 构】
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四川纳比生物科技有限公司,四川成都610041 杭州优思达生物技术有限公司,浙江杭州310053
【出 处】
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四川省畜牧兽医学会2017学术年会
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采用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)原理,根据PCV2的Cap基因设计一组交叉扩增引物,用构建的Cap基因重组质粒作为标准DNA模板,对反应体系的引物浓度、Betaine、MgSO4、dNTP、Bst酶、反应温度和时间进行优化,并结合核酸试纸条技术,建立一种简便、快速、准确的现场可视化检测PCV2的交叉引物恒温扩增检测方法(PCV2-CPA).用建立的CPA检测方法、常规PCR和ELISA方法检测经IFA方法标定的127份临床样品,比较这些方法的敏感性、特异性和符合率,通过ROC曲线图可知三种检测方法中,CPA检测方法效能最优.本实验建立的PCV2-CPA检测方法仅一台水浴锅或金属浴即可完成病毒DNA的扩增,密闭的核酸检测试纸条使结果判定直观、客观,且可有效避免气溶胶污染,可应用于PCV2的现场快速检测.
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为了给四川地区养猪场预防治疗副猪嗜血杆菌提供合理的用药方案,也为副猪嗜血杆菌耐药机制研究奠定一定基础,本试验于2014年到2016年,在四川省18个地区的养猪场分离并鉴定到97株HPS,并采用纸片法和分子鉴定方法,对这些分离株的5种β-内酰胺类药物耐药情况以及5种质粒介导的β-内酰胺类耐药基因携带情况进行检测.结果表明,分离株中耐药菌株比例达86.6％(84/97);分离株对氨苄西林、阿莫西林、青
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