奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达

来源 :中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨年学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guanxming
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  原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western-blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50 ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1:32000。因此,成功获得了奶牛MadCam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子MadCam-1的功能奠定了基础。
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