【摘 要】
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克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)己糖激酶基因,并对其进行生物信息学分析及表达分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为下一步研究己糖激酶特性和调控龙眼果实糖代谢奠定理论基础.以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列,构建pET-32a-DlHXK原核表达载体,转化到大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达.龙眼己糖激酶
【机 构】
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华南农业大学园艺学院,广州,510642 广东省农业科学院果树研究所,广州,510640
【出 处】
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2013年广东省研究生学术论坛——园艺分论坛
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克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)己糖激酶基因,并对其进行生物信息学分析及表达分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为下一步研究己糖激酶特性和调控龙眼果实糖代谢奠定理论基础.以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列,构建pET-32a-DlHXK原核表达载体,转化到大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达.龙眼己糖激酶(HXK)基因的cDNA全长序列,命名为DIHXK.DIHXK序列全长2101 bp,包括一个1488 bp的开放阅读框,预测编码496个氨基酸:进化树和同源性分析发现,该基因与温州蜜柑的同源性最近,达到了82％:荧光定量表达分析表明,DIHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,成功构建原核表达载体,能够在大肠杆菌中获得高效表达.
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