Xfect介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3高效转染Vero细胞的方法及其条件的优化

来源 :第6届中国皮肤科医师年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaolch009
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  目的:用Xfect试剂介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3转染Vero细胞,以期获得转染效率较高的方法,并检测目标片段的表达,从而为进一步研究HSV-2 LAT基因及其ORF3片段的生物学功能奠定基础。方法:用Xfect试剂介导重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3转染Vero细胞,48h后观察荧光表达情况,并计算不同转染方法分别在有无血清及质粒与Xfect Polymer比例不同时的转染效率。用RT-PCR检测ORF3片段在Vero细胞中的表达。结果:采用贴壁转染法,在有血清及质粒与Xfect Polymer比例为5μg/2μL时转染效率较高;RT-PCR可以获得目的条带,证明ORF3片段在Vero细胞中得到表达。结论:本实验从不同转染方法、转染时有无血清及质粒和Xfect Polymer的比例不同等方面探讨重组质粒pEGFP-C2/LAT-ORF3转染Vero细胞的效率,并通过RT-PCR的方法鉴定了ORF3在Vero细胞中的表达,得到了高效的该重组质粒转染Vero细胞的方法,且验证了用绿色荧光蛋白标签检验目的片段表达的可行性。本实验获得的优化条件可以显著提高Xfect Polymer对Vero细胞的转染效率;以绿色荧光蛋白作为标签鉴定目的基因在细胞中表达的方法切实可行。
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