【摘 要】
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目的探讨在苯并（a）芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中P53蛋白对P21、周期蛋白D1和CDK4蛋白间相互作用的影响。方法向转染p53小干扰RNA（p53siRNA）质粒的HELF细胞
【机 构】
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中国疾病预防控制中心化学污染物与健康重点实验室职业卫生与中毒控制所;
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目的探讨在苯并（a）芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中P53蛋白对P21、周期蛋白D1和CDK4蛋白间相互作用的影响。方法向转染p53小干扰RNA（p53siRNA）质粒的HELF细胞即p53-H细胞组、载体CMV的HELF细胞即HELF/CMV细胞组中分别加入B（a）P 2μmol·L-1作用24 h,向p53化学抑制剂Pifithrin-α（PFT-α）即HELF/CMV+PFT-α细胞组中同时加入B（a）P 2μmol·L-1和PFT-α20μmol·L-1作用24 h,各组同时设立不做任何处理的对照组。用免疫印迹（Western blot）法检测细胞中P53,P53-ser20以及P21、周期蛋白D1和CDK4蛋白水平的变化,同时利用免疫沉淀方法分析P53蛋白对P21、周期蛋白D1以及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果利用PFT-α或P53小干扰RNA技术抑制P53蛋白后,B（a）P诱导的P53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平和P21蛋白水平的增高受抑制,B（a）P诱导的周期蛋白D1水平的增加不受影响,CDK4的水平不受B（a）P的影响;免疫沉淀实验结果表明,B（a）P引起的P21和CDK4结合的增加受到抑制,B（a）P引起的P21与周期蛋白D1结合的增加不受影响,周期蛋白D1和CDK4的结合不受B（a）P的影响。结论 B（a）P通过P53蛋白影响人胚肺成纤维细胞P21和CDK4的结合。
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