【摘 要】
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目的：探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤辐射敏感性的影响及相关的分子机制.方法：通过基因转染技术将真核表达质粒pEGFP-C3-PHLDA2导入骨肉瘤U2OS细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞；采用CKK8比色法测定细胞增殖活性；克隆形成实验观察细胞存活能力；Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡；Western blot测定蛋白的表达变化；建立入骨肉瘤裸鼠
【机 构】
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成都军区昆明总医院肿瘤科 解放军总医院放射治疗科
【出 处】
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第九届泛珠江区域放射肿瘤学学术大会暨肿瘤放射治疗多中心协作研讨会、重庆市医学会放射肿瘤治疗学专业委员会2014年会
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目的：探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤辐射敏感性的影响及相关的分子机制.方法：通过基因转染技术将真核表达质粒pEGFP-C3-PHLDA2导入骨肉瘤U2OS细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞；采用CKK8比色法测定细胞增殖活性；克隆形成实验观察细胞存活能力；Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡；Western blot测定蛋白的表达变化；建立入骨肉瘤裸鼠移植瘤模型观察PHLDA2基因的体内增敏效应.结果：经筛选获得的骨肉瘤亚克隆U2OS-PHLDA2细胞中PHLDA2蛋白表达上调；不同剂量的X射线照射后,在对应剂量点PHLDA2高表达组的增殖能力(4、8 Gy)和克隆形成能力(2-8 Gy)明显降低,同时显著提高了X射线对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05)；经8 Gy X射线照射后,PHLDA2高表达组的凋亡增加,凋亡率为17.97±1.69％,同时伴caspase-3活性的明显提高,差异与对照组相比具有统计学意义(P＜0.05).结论：外源性PHDLA2基因在U2OS细胞中稳定过表达能够提高骨肉瘤对X射线的敏感性,其可能是通过增强caspase-3的活性、促进射线诱导的细胞凋亡作用实现的.
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