【摘 要】
：
目的：探究mm9_circ_011539 在PM2.5 暴露小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 中的表达改变及其在DNA 损伤应答(DDR)中的功能.方法：使用0、25、50、75、100μg/ml 的PM2.5 悬液暴露RAW264.7 细胞24h 和48 h,用qRT-PCR 检测mm9_circ_011539 的表达水平,Western blot 检测RAW264.7 细胞中Y-H2AX 表达
【机 构】
：
广州医科大学公共卫生学院化学致癌研究所呼吸疾病国家重点实验室,广州,511436
【出 处】
：
中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
论文部分内容阅读
目的：探究mm9_circ_011539 在PM2.5 暴露小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 中的表达改变及其在DNA 损伤应答(DDR)中的功能.方法：使用0、25、50、75、100μg/ml 的PM2.5 悬液暴露RAW264.7 细胞24h 和48 h,用qRT-PCR 检测mm9_circ_011539 的表达水平,Western blot 检测RAW264.7 细胞中Y-H2AX 表达水平,中性单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测DNA 双链断裂水平；通过Sanger 测序验证mm9_circ_011539 的qRT-PCRPCR 产物序列；通过RNase R 去线性酶处理鉴定circRNA 的环状结构,RNA 核质分离实验检测circRNA 在RAW264.7 细胞中的分布；干扰mm9_circ_011539,通过Western blot 和彗星实验检测RAW264.7 细胞的DNA 损伤水平；生物信息学预测可能与mm9_circ_011539 结合的miRNA.结果：与对照组相比,PM2.5 暴露RAW264.7 细胞后,qRT-PCR 表明mm9_circ_010490的表达水平升高,Western blot 表明Y-H2AX 表达水平增加,彗星实验表明PM2.5 能引起细胞DNA 损伤,Olive 尾距增加,都有着明显的时间/剂量效应关系；Sanger 测序证实mm9_circ_011539 的环状结构；mm9_circ_011539 对RNase R 耐受,且其亲本基因Ccnt2丰度降低较为明显；RNA 核质分离实验表明mm9_circ_011539 在胞质和胞核都有分布；对mm9_circ_011539 进行干扰后,Western blot 表明Y-H2AX 表达水平显著下降,彗星实验表明能缓解DNA 损伤,Olive 尾距降低明显； 生物信息学预测可能和mmu-miR-7657-3p、mmu-miR-8094、mmu-miR-12204-5p、mmu-miR-150-5p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-466d-5p 以及mmu-miR-466k 存在结合关系.结论：大气PM2.5 暴露可诱导RAW264.7 细胞发生DNA 损伤,mm9_circ_011539 表达水平上升,且能调控PM2.5 诱导的DNA 损伤应答.
其他文献
目的：1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)是一种普遍存在的环境污染物,广泛存在于环境的空气、地下水以及饮用水中.过量的高浓度接触1,2-DCE 会导致动物和人类的中毒性脑水肿.已有研究发现1,2-DCE 可以诱导小脑、肝脏和睾丸细胞凋亡,提示1,2-DCE除了可致脑水肿,也可能通过诱导神经细胞凋亡介导其神经毒性.方法：40 只NIH 雄性小鼠连续28 天通过全身动式吸入1,2-DCE(0、100、3
目的：甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH),又称“冰毒”,因其合成简单,成本低,易成瘾,已成为我国毒品滥用中的“头号毒品”.METH 可诱导神经元发生变性,坏死,神经系统的永久性损害.前期基因芯片表达谱发现Lipocalin-2(LCN2)在METH处理PC12 细胞中表达上调.LCN2 属于Lipocalin 家族一员,可调节细胞死亡与增殖并在多种神经系统退行性病中发挥重要作用
目的 氯化钴是散发性神经退行性疾病的潜在环境风险化学物之一.组蛋白乙酰化稳态失衡是神经退行性疾病的潜在机制,但其与环境神经毒物作用的关系不明.因此,本研究拟探讨组蛋白乙酰化修饰在氯化钴致神经细胞损害中的作用及机制.方法(1)通过体外培养人脑神经胶质瘤细胞(SHSY5Y),使用不同浓度和作用时间的氯化钴处理SHSY5Y 细胞.CCK-8 检测细胞活力变化,蛋白质免疫印迹分别检测组蛋白H3、H4 乙酰
目的 本研究探索了新型石墨烯量子点(Grapheme quantum dots,GQDs)导致小胶质细胞铁死亡及其潜在的作用机制.方法 将BV2 细胞暴露于25 至100 μg/mL 的氮掺杂GQDs(N-GQDs)和100 μg/mL 的氨基修饰GQDs(A-GQDs),或者预处理铁死亡抑制剂Fer-1、铁螯合剂DFOM、抗氧剂Trolox 和线粒体特异性ROS 清除剂MitoTEMPO 后再暴
目的：随着水体污染的加剧,微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)潜在的毒性作用及其机制引起了人们的广泛关注。研究发现MC-LR 具有生殖毒性,可以诱导卵巢细胞中内质网应激和自噬的发生,但具体机制尚不明确。内质网应激是近年来研究热点,内质网作为钙离子的主要储存器官,其应激能引起细胞内钙离子增多,从而激活钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(Calcium/calmodulin-dep
目的：流行病学研究揭示了环境中的大气细颗粒物污染与肺癌的发生密切相关.越来越多的研究表明DNA损伤会导致细胞功能障碍和一些与年龄相关疾病的提前发生,其中包括癌症.DNA损伤作为肿瘤的早期事件,研究circRNA调控PM2.5致DNA损伤的分子机制为深入研究其致癌提供了支持.本研究主要通过低浓度PM2.5暴露两种人正常支气管细胞构建PM2.5致DNA损伤的模型,旨在研究circRNA在PM2.5致D
目的 由于重金属其存在形态的多变性、累积性和不可降解性，易通过不同暴露途径对人体健康造成危害，本研究主要评价人体重金属内暴露对氧化损伤水平的影响.方法 我们对263 个石家庄社区人群进行研究，基于自愿原则，我们对人群进行问卷调查、健康体检以及血尿样本的收集.我们通过查阅文献挑选出大气污染中常见的五种重金属铅、铬、镉、砷、铜，通过ICP-MS 检测尿中重金属含量，然后使用全自动临床化学分析仪测定尿肌
放射致DNA 损伤应答是细胞在放射损伤下维持细胞稳态的重要调控机制，其在DNA 的复制、细胞的分裂或基因组损伤修复中具有重要意义.mRNA 的N6-甲基腺嘌呤修饰(m6A)被证实在细胞发育和疾病发生等方面具有重要作用，研究m6A 修饰参与的放射损伤应答可以从表观遗传层面对DNA 损伤应答的调控作用以及机制进行新的阐释.目的：为表观遗传层面辐射损伤的研究奠定基础，同时发现重要靶分子为放射损伤的生物学
目的：脂肪含量和肥胖相关基因(Fat mass and obesity associated gene,FTO)作为RNA 去甲基化酶,影响被修饰基因的表达,在肥胖以及肿瘤中起着重要的作用.DNA损伤应答在肿瘤发生发展中同样至关重要,但FTO 是否参与调节DNA 损伤应答及其机制相关研究较少,值得深入探讨.方法：使用不同DNA 损伤修复机制的化合物(DNA 交联剂、DNA 双链断裂剂、烷化剂和嘌呤
目的：揭示目标外泌体lncRNA 在PM2.5 致呼吸系统的DNA 损伤效应中的作用,并初步探讨其分子机制.方法：采用PM2.5 染毒HBE 细胞、将染毒后细胞与正常HBE 细胞共培养以及将染毒后细胞分泌的外泌体和正常HBE 细胞共孵育三种处理方式,通过ELISA 试剂盒、Western blot和碱性彗星实验检测HBE 细胞DNA 损伤情况.并利用高通量测序检测正常细胞和PM2.5染毒细胞外泌体