【摘 要】
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根据GeneBank中猪IFN-γ基因设计引物对,利用RT-PCR技术克隆并测定了猪外周血白细胞IFN-γ基因,定名为poIFNR1,其ORF长度为501个核苷酸,其成熟肽包含144个氨基酸.将其成熟肽基因序列根据大肠杆菌密码子的偏嗜性改造后克隆入原核表达载体pBV220中,鉴定后筛选表达重组菌进行发酵培养、温度诱导后,收集菌体超声波破碎后提取包涵体并进行初步纯化,利用胱氨酸-半胱氨酸再氧化法对纯
【机 构】
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济南军区疾病预防控制中心,济南,250014 山东信得药业有限责任公司,青岛,266061
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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根据GeneBank中猪IFN-γ基因设计引物对,利用RT-PCR技术克隆并测定了猪外周血白细胞IFN-γ基因,定名为poIFNR1,其ORF长度为501个核苷酸,其成熟肽包含144个氨基酸.将其成熟肽基因序列根据大肠杆菌密码子的偏嗜性改造后克隆入原核表达载体pBV220中,鉴定后筛选表达重组菌进行发酵培养、温度诱导后,收集菌体超声波破碎后提取包涵体并进行初步纯化,利用胱氨酸-半胱氨酸再氧化法对纯化后的包涵体变性液进行分段稀释法复性研究.以细胞病变抑制法(MDBK-VSV为基本检测系统)测定复性液的抗病毒比活性高达5.8×106U/mg.
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