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目的:负性共刺激分子B7-H4在免疫调节中起重要作用。本研究旨在研制特异性的鼠抗人B7-H4单克隆抗体,并初步鉴定其生物学特性。研制特异性检测人可溶性B7-H4(sB7-H4)的ELISA试剂盒,为定量分析不同来源的临床标本和研究B7-H4的功能提供有效的检测手段。方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞CHO/B7-H4免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术将骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾脏细胞进行融合,运用流式细胞术对杂交瘤细胞的培养上清进行初筛,将合格的杂交瘤细胞株反复检测和亚克隆,成功获得三株特异性好且能够持续稳定分泌鼠抗人B7-H4单抗的杂交瘤细胞株;采取CBA法和快速定性试纸法鉴定抗体亚型;通过Western blot和ELISA以及两株单抗之间竞争实验分析所得单抗的生物学特性;用流式细胞术和间接免疫荧光分析B7-H4在多种肿瘤细胞表面的表达水平。利用本实验室自主研制的anti-B7-H4 mAb(5C2)作包被抗体,biotin-anti-B7-H4mAb(XANO.7)作为检测抗体,建立双抗体夹心sB7H4酶联检测试剂盒,同时进行试剂盒稳定性和精确性进行分析。结果:成功获得三株持续、稳定分泌鼠抗人B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5C2、11G4和XANO.7,单克隆抗体5C2和11G4的重链为IgG1,XANO.7的重链为IgG2a,轻链均为κ链;抗体可用于进行流式细胞术、Western blot、免疫组化等检测;竞争实验结果显示5C2和11G4两株单克隆抗体与XANO.7抗体识别不同的抗原位点;功能实验结果显示11G4可能为阻断性抗体。成功建立了检测人sB7-H4的ELISA体系,该方法能特异性测定人sB7H4蛋白,而与其他蛋白无交叉反应,试剂盒检测标准曲线在B7-H4.Fc蛋白浓度为1.5625-100ng/ml区间内呈现良好的线性关系。该方法具有良好的稳定性和精确性。结论:成功获得三株特异性鼠抗人B7-H4单克隆抗体,为研究B7-H4的生物学特性提供良好的工具。建立了特异性检测人sB7-H4的ELISA试剂盒,为定量分析血清中该分子的表达提供了有效的检测手段。