目的PBP2a是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)细胞壁合成的转肽酶(TPase)活性提供者,与MRSA耐药性的发生密切相关。通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白,为深入探讨PBP2a介导MRSA耐药的机制奠定基础。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白的编码基因MecA,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSAN315株基因组DNA,经Sau3AI部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHI位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a有相互作用的蛋白或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因(LacZ)的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315基因组,插入片段最长者944bp,最短者343bp,9个插入片段中含14个编码基因,其中10个功能未知,1个编码二氢吡啶二羧酸合酶、1个编码二氢吡啶二羧酸还原酶,2个编码的染色体解离SMC蛋白。9个克隆中介导与PBP2a相互作用的多肽由14-47氨基酸组成。结论利用细菌双杂交技术从MRSA基因组文库中成功筛选到与PBP2a相互作用的多肽,为下一步研究这些多肽对PBP2a活性的影响,深入认识PBP2a介导MRSA耐药性发生的机理奠定了坚实的基础。